Armaghane Danesh

fa توانمندی پرگنونولون در تکثیر سلول‌های بنیادی عصبی موشی و کاستن نشانگرهای التهابی و اکسیدانی پس از القای التهاب با لیپوپلی ساکارید در شرایط آزمایشگاهی The Ability of Pregnenolone in Proliferation of Mouse Neural Stem Cells and Reduction of Inflammatory and Oxidant Markers after Induction of Inflammation with Lipopolysaccharide in Vitro عمومى General پژوهشي Research زمینه و هدف: پرگنونولون به عنوان پیش‌ساز سایر هورمون‌های استروئیدی عمل می‌کند و اثر خود را به عنوان یک مولکول ضدالتهابی برای حفظ هموستاز ایمنی در شرایط مختلف التهابی اعمال می‌کند. در این بیماری‌ها کاهش سطح پرگنونولون مشاهده شده است که بر نقش آن در محافظت عصبی و بازسازی عصبی و نقش ضد التهابی آن تأکید دارد، بنابراین هدف از این مطالعه، تعیین و توانمندی پرگنونولون در تکثیر سلول‌های بنیادی عصبی موشی و کاستن نشانگرهای التهابی و اکسیدانی پس از القای التهاب با لیپوپلی ساکارید در شرایط آزمایشگاهی بود. روش بررسی: در این مطالعه تجربی که در سال 1399 در دانشگاه علوم پزشکی یاسوج انجام شد، سلول‌های بنیادی عصبی از برجستگی‌های گانگلیونی خارجی مغز جنین 14 روزه موش سوری به روش استاندارد تهیه گردید. زنده مانی سلول‌ها به روش MTT و به دنبال تیمار با غلظت‌های 1، 2، 5، 10 و 15 میکرومولار پرگنونولون و تیمار توام پرگنونولون با مدل التهابی لیپوپلی ساکارید(LPS)  انجام شد. هم‌چنین تعداد نوروسفرها و سلول‌های مشتق از نوروسفرها در شرایط استاندارد انکوبه شد و پس از 5 روز شمارش گردید. محیط رویی سلول‌ها برداشته و به روش الیزا میزان نشانگرهای اکسیدانی و آنتی اکسیدانی  MDA, NO FRAP,  و نشانگرهای التهابی  IL6وTNFα اندازه‌گیری شد. داده‌های جمع‌آوری شده با استفاده از نرم‌افزار آماری واریانس  یک طرفه و تست تعقیبی توکی تجزیه و تحلیل شدند. یافته‌ها: نتایج این مطالعه نشان داد که زنده مانی سلول‌های بنیادی عصبی به وسیله LPS کاهش معنی‌داری نسبت به گروه کنترل نشان داد در حالی که پرگنونولون باعث افزایش معنی‌دار این سلول‌ها نسبت به گروه کنترل گردید و غلظت 10 میکرومولار بیشترین زنده مانی را نشان داد (01/0p<)، هم‌چنین در تیمار توأم LPS و پرگنونولون با غلظت 10 میکرومولار، تعداد نوروسفرها و سلول‌های منتج ازنورسفرها از آن  به صورت معنی‌دار  نسبت به گروه LPS افزایش یافت(به ترتیب 001/0p< و 0001/0p< و0001/0p<). پرگنونولون به صورت معنی‌داری میزان NO حاصل از التهاب ایجاد شده LPS را نسبت به گروه کنترل کاهش داد(0001/0p<)، به علاوه کاهش معنی‌دار میزان NO در تیمار توأم پرگنونولون و LPS در غلظت‌ها مختلف نسبت به گروه LPS مشاهده گردید(0001/0p<). از سوی دیگر این نورواستروئید به صورت تنها و هم‌چنین توأم با LPS باعث کاهش معنی‌دار سطح IL-6 نسبت به گروه LPS گردید(0001/0p<) و تیمار با غلظت 15 میکرومولار پرگنونولون میزان TNF-α را به صورت معنی‌داری کاهش داد(0001/0p<). نتیجه‌گیری: نتایج مطالعه حاضر نشان داد که پرگنونولون با اثر بر فاکتورهای التهابی می‌تواند تکثیر سلول‌های بنیادی عصبی را در شرایط ایجاد التهاب افزایش دهد، هم‌چنین می‌تواند میزان نشانگرهای التهابی و اکسیدانی در مدل التهابی محیط کشت کاهش دهد.   Background & aim: Pregnenolone acts as a precursor to other steroid hormones and exerts its effect as an anti-inflammatory molecule to maintain immune homeostasis in various inflammatory conditions. In these diseases, a decrease in the level ofP has been observed, which emphasizes its role in neuroprotection and nerve regeneration and its anti-inflammatory role. Accordingly, the purpose of the present study was to determine the ability of Pregnenolone in the proliferation of mouse neural stem cells and reduce inflammatory and oxidant markers. of inducing inflammation with lipopolysaccharide in laboratory conditions. Methods: In the present experimental study conducted at Yasuj University of Medical Sciences, neural stem cells (NSCs) were isolated from the embryonic cortex of E14 mice with standard protocol and incubated for 5 days. Subsequently, neurosphere formation and propagation for second passage the survival of the cells was done after pregnenolone combined treatment with lipopolysaccharide (LPS) inflammatory model. The number of neurospheres and cells derived from neurospheres were counted after 5 days of incubation in the inflammatory model. The supernatant of the cells was removed and the levels of oxidant and antioxidant markers MDA, NO FRAP, and inflammatory markers IL6 and TNFα were measured by ELISA method. Data were analyzed by one-way variance statistical method and Tukey's post hoc test. Results: The results indicated that pregnenolone with its effect on inflammatory factors could increase the proliferation of neural stem cells in conditions of inflammation and the greatest effect was observed in the group treated with 10 μM dose of pregnenolone with an increase of 68% compared to the LPS group. On the other hand, it caused a decrease in the inflammatory factors TNF-α (12%) and IL-6 (30%) and oxidative stress factors including NO (38%) and MDA (20%) compared to the LPS group, as well as a significant increase FRAP was an antioxidant marker (P<0.0001) in the model of inflammation caused by LPS in the culture medium of mouse neural stem cells. Conclusion: The results of the present study indicated that Pregnenolone, by affecting inflammatory factors, increased the proliferation of neural stem cells in the conditions of inflammation, and it was as well able to reduce the amount of inflammatory and oxidant markers in the inflammatory model of the culture medium.   سلول بنیادی عصبی, نورواستروئید, پرگنونولون, مدل التهاب, لیپوپلی ساکارید, استرس اکسیداتیو Neural stem cell, Neurosteroid, pregnenolone, Inflammation model, lipopolysaccharide, Oxidative stress 621 637 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-36-1&slc_lang=fa&sid=1 K Negintaji کوروش نگین تاجی k.negintaji@gmail.com 100319475328460028676 100319475328460028676 No Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran, گروه زیست‌شناسی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت، ایران M Foroozanfar محسن فروزان فر mforozanfar@yahoo.com 100319475328460028677 100319475328460028677 No Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran, گروه زیست‌شناسی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت، ایران M Jafarinia مجتبی جعفرنیا m.jafarinia@miau.ir 100319475328460028678 100319475328460028678 No Department of Biology, Marvdasht Branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran, گروه زیست‌شناسی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت، ایران A Ghanbari امیر قنبری amirghanbari52@yahoo.com 100319475328460028679 100319475328460028679 Yes Cellular and Molecular Research Center, Yasuj University of Medical Sciences, Yasuj, Iran مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی یاسوج، یاسوج، ایران