fa تشخیص کوپروآنتی ژن‌های فاسیولا با استفاده از آنتی‌بادی‌های پلی کلونال تولید شده بر علیه آنتی‌ژن دفعی ترشحی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا انگل شناسی Parasitology پژوهشي Research <div dir="ltr"><span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;"><b><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">زمینه و هدف:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> روش‌های پارازیتولوژیک جهت تشخیص فاسیولیازیس دارای محدودیت‌هایی از جمله؛ دفع متناوب تخم انگل، طولانی بودن مرحله حضور تخم انگل در مدفوع می‌باشند. هم‌چنین روش‌های سرولوژی بر پایه شناسایی آنتی‌ بادی‌های ضدانگل، قادر به تشخیص عفونت‌های گذشته از عفونت‌های جدید نیستند، لذا تشخیص کوپرو آنتی‌ژن‌های انگل در مقایسه با سایر روش‌های تشخیصی قابل اعتمادتر می‌باشند. بنابراین هدف از این مطالعه تعیین و </span></span></span><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">تشخیص کوپروآنتی ژن‌های فاسیولا با استفاده از </span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">آنتی‌</span></span></span><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">بادی‌های پلی‌کلونال تولید شده بر علیه آنتی‌ژن دفعی ترشحی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا بود</span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">.</span></span></span></span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;">&nbsp;</span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;"><b><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">روش بررسی:</span></span></span></b><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> در این مطالعه تجربی &nbsp;که در سال 1396ـ&nbsp; 1395 انجام شد، کرم‌های بالغ فاسیولا از کبد دام‌های آلوده جمع‌آوری شدند و با روش مولکولی هضم آنزیمی تعیین گونه شدند. آنتی‌ژن دفعی‌ـ ترشحی از هر دو گونه فاسیولا تهیه گردید. به منظور تولید آنتی‌بادی پلی کلونال 2 خرگوش برای هر آنتی‌ژن ایمیونیز شدند. آنتی‌بادی</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size: 8pt;"><span style="color: black;"><span arial="" style="font-family:;">IgG </span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">&nbsp;تولید شده با روش کروماتوگرافی میل ترکیبی تخلیص و با آنزیم پراکسیداز کونژوگه گردیدند. </span></span></span><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">کوپروآنتی‌ژن‌ها</span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> از 99 نمونه مدفوع دامی شامل؛ </span></span></span><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">30 نمونه آلوده به فاسیولا، 39 نمونه مبتلا به سایر بیماری‌های انگلی و30 نمونه سالم تهیه گردیدند. در این مطالعه 2</span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> سیستم ساندویچ الیزا با استفاده از آنتی‌بادی‌های پلی کلونال تولید شده جهت شناسایی کوپرو آنتی‌ژن فاسیولا طراحی و ارزیابی شدند. ویژگی‌های آماری تست‌ها با استفاده از نرم‌افزار مدیکال کلکلتور 3، 4، 16 محاسبه گردیدند. ضریب کاپا و بررسی هم‌خوانی بین تست‌های ساندویچ الیزا محاسبه شد. </span></span></span></span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;"><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">&nbsp; <b>یافته‌ها:</b> تست ساندویچ الیزا با استفاده از آنتی‌بادی‌های پلی‌کلونال تولید شده بر علیه آنتی‌ژن دفعی‌ـ ترشحی فاسیولا هپاتیکا و فاسیولا ژیگانتیکا به ترتیب حساسیت و ویژگی 67/96، 86/89 درصد و 67/96، 3/91 درصد را نشان دادند. هم‌چنین توافق بالایی</span></span></span><span dir="LTR" style="font-size: 8pt;"><span style="color: black;"><span arial="" style="font-family:;">)</span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> 9/0</span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 7pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"><</span></span></span><span lang="FA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> ضریب کاپا) &nbsp;بین آنتی‌بادیی‌های پلی کلونال تولید شده بر علیه هر دو گونه فاسیولا جهت تشخیص فاسیولیازیس مشاهده گردید. </span></span></span></span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;">&nbsp;</span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;"><b><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;">نتیجه‌گیری:</span></span></span></b><span lang="AR-SA" style="font-size: 10pt;"><span style="color: black;"><span style="font-family: Yagut;"> در مجموع یافته‌ها نشان دادند که آنتی بادی‌های پلی‌کلونال تولید شده بر علیه آنتی‌ژن‌دفعی ـ ترشحی هر دو گونه فاسیولا دارای کارایی مناسبی جهت شناسایی کوپرو آنتی‌ژن‌های فاسیولا و تشخیص فاسیولیازیس می‌باشند.</span></span></span></span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="unicode-bidi: embed;"><span style="direction: rtl;">&nbsp;</span></span></span><br> &nbsp;</div> <span style="line-height: normal;"><font color="#000000"><b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">Background & aim: </span></span></b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">Parasitological methods for diagnosing fascioliasis have limitations such as; Intermittent excretion of parasite eggs is the long stage of presence of parasite eggs in the feces. Also, serological methods based on the detection of antiparasitic antibodies are not able to distinguish past infections from new infections, so the detection of parasitic co-antigens is more reliable than other diagnostic methods. Therefore, the aim of the present study was to determine and detect <i>Fasciola</i> coproantigens using polyclonal antibodies produced against <i>Fasciola hepatica</i> and <i>Fasciola gigantica</i> secretory excretory antigens.</span></span></font></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="font-size: 5pt;"><span arial="" style="font-family:;"><font color="#000000">&nbsp;</font></span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><font color="#000000"><b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">Methods</span></span></b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">: In the present experimental study conducted in 2016-2017, adult <i>Fasciola</i> worms were collected from the livers of infected animals and species were determined by molecular method of enzymatic digestion. Excretory-secretory antigen was prepared from both <i>Fasciola</i> species. In order to produce polyclonal antibodies, 2 rabbits were immunized for each antigen. IgG antibodies produced were purified by affinity chromatography and conjugated with peroxidase enzyme. Coproantigens from 99 animal fecal samples included; 30 samples infected with <i>Fasciola</i>, 39 samples with other parasitic diseases and 30 healthy samples were prepared. In the present study, two ELISA sandwich systems were designed and evaluated using polyclonal antibodies produced to identify <i>Fasciola</i> co-antigen. Statistical characteristics of the tests were calculated using Medical Collector 16.4.3 software. Kappa coefficient and consistency check between ELISA sandwich tests were calculated using SPSS software version 20.</span></span></font></span><br> <span style="line-height: normal;"><b><span style="font-size: 5pt;"><span arial="" style="font-family:;"><font color="#000000">&nbsp;</font></span></span></b></span><br> <span style="line-height: normal;"><font color="#000000"><b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">Results</span></span></b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">: Sandwich ELISA test using polyclonal antibodies produced against <i>Fasciola hepatica</i> and <i>Fasciola gigantica</i> secretory antigens showed 96.67%, 89.86% and 96.67% and 91.3%, respectively. Moreover, a high agreement (kappa coefficient <0.9) was observed between polyclonal antibodies produced against both <i>Fasciola</i> species for the diagnosis of fascioliasis.</span></span></font></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="font-size: 5pt;"><span arial="" style="font-family:;"><font color="#000000">&nbsp;</font></span></span></span><br> <span style="line-height: normal;"><font color="#000000"><b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">Conclusion</span></span></b><span style="font-size: 10pt;"><span arial="" style="font-family:;">: Overall, the findings indicated that polyclonal antibodies produced against excretory-secretory antigens of both <i>Fasciola</i> species have good efficacy for detection of <i>Fasciola</i> co-antigens and diagnosis of fascioliasis.</span></span></font></span><br> <span style="line-height: normal;"><span style="font-size: 4pt;"><span arial="" style="font-family:;"><font color="#000000">&nbsp;</font></span></span></span><br> &nbsp; کوپرو آنتی‌ژن, فاسیولا, آنتی‌ژن دفعی‌ـ ترشحی Coproantigen, Fasciola, Excretory-secretory antigen 170 184 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-2481-1&slc_lang=fa&sid=1 S Abdollahi Khabisi سمانه عبدالهی خبیصی samanekhabisi@gmail.com 3620365687 100319475328460025126 Yes Department of Parasitology and Mycology, Zahedan University of Medical Sciences, Zahedan, Iran گروه انگل و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی زاهدان، زاهدان، ایران B Sarkari بهادر سرکاری sarkarib@yahoo.com 100319475328460025127 100319475328460025127 No Department of Parasitology and Mycology, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran گروه انگل و قارچ شناسی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران