Armaghane Danesh

fa ارزیابی اثرات سایتوتوکسیک و آپوپتوتیک سیمواستاتین در رده سلولی سرطان استخوان MG63 Evaluation of Cytotoxic and Apoptotic Effects of Simvastatin in Bone Cancer Cell line(MG-63) تخصصي Special پژوهشي Research زمینه و هدف: سرطان عبارت است از ناهماهنگی میان رشد و مرگ سلول‌ها که نتیجه آن انباشته شدن تعداد بیش از حد سلول‌ها است. سرطان استخوان یک نوع بسیار جدی از سرطان است و زمانی اتفاق می‌افتد که سلول‌های استخوان‌ساز دچار مشکل شوند، لذا هدف از این مطالعه تعیین و بررسی اثرات سایتوتوکسیک و آپوپتوتیک سیمواستاتین در رده سلولی سرطان استخوانMG63  بود.   روش بررسی: در این مطالعه تجربی که در اردیبهشت 1398 در واحد علوم پزشکی دانشگاه آزاد اسلامی انجام شد، سلول‌های MG63 کشت داده شدند و سپس سلول‌ها با غلطت‌های مختلف سیمواستاتین به مدت 24 ساعت انکوبه شدند و دوز IC50 با استفاده از آزمون ام‌تی‌تی اندازه‌گیری شد. اثرات سیمواستاتین بر روی مکانیزم‌های مرگ سلولی مانند آپوپتوز و نکروز به وسیله فلوسایتومتری مورد ارزیابی قرار گرفت. از تست  ریل تام پی سی آر برای بررسی بیان ژن آنزیم‌های کاسپاز 3، 8 و9 استفاده شد و در آخر سلول‌های تیمار شده با دوز IC50 سیمواستاتین با تکنیک رنگ‌آمیزی فلوسایتومتری هوخست مورد بررسی قرار گرفتند. داده‌های جمع‌آوری شده با استفاده از آزمون آماری تی دانشجویی تجزیه و تحلیل شدند.   یافته‌ها: نتایج آزمون MTT  نشان داد که سیمواستاتین در دوز 155 میکروگرم بر میلی‌لیتر 50 درصد سلول‌های سرطانی(IC50) را از بین برد. از طرفی ارزیابی فلوسایتومتری نشان داد که سلول‌های MG63 تیمار شده با سیمواستاتین(دوز 300 میکروگرم بر میلی‌لیتر) بیش از 90 درصد نسبت به گروه کنترل دچار مرگ سلولی از نوع آپاپتوز شدند. بررسی آنزیم‌های کاسپاز 3 ، 8 و 9 با استفاده از تکنیک Real-time PCR نشان داد که بیان ژن‌های کاسپاز 3 و 9 اختلاف معنی‌داری داشت(001/0(p<، اما در مورد بیان ژن کاسپاز 8 اختلاف معنی‌داری مشاهده نشد(05/0p<). در تکنیک رنگ‌آمیزی هوخست تغییر رنگ سلول‌های گروه تیمار نسبت به گروه کنترل، حاکی از متراکم و متلاشی شدن هسته سلول بود که این موضوع بیانگر مرگ سلولی از نوع آپاپتوز بود.   نتیجه‌گیری: در نهایت نتایج به دست آمده از این پژوهش نشان داد که داروی سیمواستاتین در محیط کشت سلولی می‌تواند موجب اثرات سایتوتوکسیک و آپوپتوتیک در سلول‌های سرطان استخوان MG63 شود که بر این اساس، بررسی احتمال کاربرد داروی سیمواستاتین در درمان سرطان استخوان حایز اهمیت است. Background & aim: Cancer is a mismatch between cell growth and death that results in excessive accumulation of cells. Bone cancer is a very serious type of cancer and occurs when osteoporotic cells have problems. The aim of this study was to evaluate the cytotoxic and apoptotic effects of simvastatin on bone cancer MG63 cell line.   Methods: In the present experimental study conducted in May 2017 in the Medical Sciences Branch of Islamic Azad University, MG63 cells were cultured and subsequently incubated with different concentration of simvastatin for 24 hours. Afterwards, the IC50 dose was measured using MTT assay. The effects of simvastatin on cell death mechanisms such as apoptosis and necrosis were evaluated by flow cytometry. PCR test was used to evaluate the gene expression of caspase 3, 8 and 9 enzymes. Finally, the cells were treated with IC50 dose of simvastatin and then examined by Hoochst flow cytometry staining technique. The collected data were analyzed using t-test.   Results: The results of MTT test indicated that simvastatin at a dose of 155 μg / ml killed 50% of cancer cells (IC50). On the other hand, flow cytometric evaluation revealed that MV63 cells treated with simvastatin (300 μg / ml) had more than 90% apoptotic cell death compared to the control group. Evaluation of caspase 3, 8 and 9 enzymes using real-time PCR technique displayed a significant difference in the expression of caspase 3 and 9 genes (p <0.001, but no significant difference was observed in the expression of caspase 8 gene (0.05). In Hochst staining technique, the discoloration of the cells in the treatment group compared to the control group indicated that the cell nucleus was dense and fragmented, which indicated apoptotic cell death.   Conclusion: Finally, the results of the present study revealed that simvastatin in cell culture medium can induce cytotoxic and apoptotic effects in bone cancer cells (MG63 cell line), therefore, it is important to consider the possibility of using simvastatin in the treatment of bone cancer.     سیمواستاتین,MG63, سرطان استخوان, کاسپاز Simvastatin, MG63 Cell Line, Bone Cancer, Caspase 293 305 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1953-1&slc_lang=fa&sid=1 MA Soltani محمد امین سلطانی aminsoltani787@gmail.com 2360303805 100319475328460021192 No Department of Basic Sciences, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه علوم پایه، واحد علوم پزشکی تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران T Naji طاهره ناجی tnaji2002@gmail.com 0939442639 100319475328460021193 Yes Department of Basic Sciences, Tehran Medical Sciences, Islamic Azad University, Tehran, Iran گروه علوم پایه، واحد علوم پزشکی تهران، دانشگاه آزاد اسلامی، تهران، ایران R Ahmadi رحیم احمدی rahahmadi@yahoo.com 100319475328460021194 100319475328460021194 No Department of Physiology, Hamedan Branch, Islamic Azad University, Hamedan, Iran. گروه فیزیولوژی، واحد همدان، دانشگاه آزاد اسلامی، همدان، ایران