fa طراحی آغازگرهای واکنش زنجیره‌ای پلیمراز و کارایی آنها به منظور شناسایی جهش‌های ژن FAH عامل بیماری تیروزینمی نوع یک بیوشیمی Biochemistry كاربردي Applicable <strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">زمینه و هدف:</span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> تیروزینمی نوع یک بیماری اتوزومی مغلوب به دلیل نقص آنزیم فوماریل استواستات هیدرولاز(</span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">FAH</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">) می&shy;باشد، تا کنون حدود 40 جهش پاتوژن برای این ژن معرفی شده است. هدف از این تحقیق تعیین و طراحی آغازگرهای واکنش زنجیره‌ای پلیمراز و کارایی آنها به منظور شناسایی جهش‌های ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">FAH</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> عامل بیماری تیروزینمی نوع یک بود. </span></span><br> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">.</span></span><br> <strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">روش بررسی:</span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> در این مطالعه موردـ شاهدی، 12 نفر وارد مطالعه شدند و در دو گروه مساوی؛ اول شش نفر مبتلا به بیماری تیروزینمی نوع یک و گروه دوم شش نفر غیر مبتلا، پس از اخذ رضایت آگاهانه نمونه خون استخراج شد و سپس استخراج </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">DNA</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> &nbsp;از نمونه‌های خون انجام گرفت. برای قسمت&shy;هایی از ژن که در پژوهش‌های قبلی جهش گزارش شده بود، آغازگر واکنش زنجیره&shy;ای پلیمراز طراحی شد. اختصاصیت آغازگرهای طراحی شده با بانک‌های اطلاعاتی آنلاین مورد ارزیابی قرار گرفت. سپس طی واکنش زنجیره&shy;ای پلیمراز قطعات ژن تکثیر شد. سپس قطعات تکثیر یافته پس از تخلیص تعیین توالی شدند و در نهایت آنالیز توالی به منظور پیدا کردن جهش عامل بیماری انجام گرفت. </span></span><br> &nbsp;<br> <strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">یافته‌ها:</span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> آغازگرهای طراحی شده قطعات ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">FAH</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> را به طور کاملاً اختصاصی تکثیر کردند. توالی&shy;یابی قطعات تکثیر شده منجر به شناسایی جهش بی‌معنی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">+709 C>T</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> در اگزون 10 ژن هر شش مورد بیمار مورد مطالعه گردید. والدین افراد بیمار ناقل این جهش ژنتیکی بودند. در هیچ یک از افراد گروه کنترل جهش ژنتیکی در ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">FAH</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> یافت نشد.</span></span><br> &nbsp;<br> <strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">نتیجه‌گیری:</span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> جهش بی‌معنی </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">&nbsp;+709 C>T</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;">یک جهش بیماری‌زا در ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">FAH</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> می‌باشد که قبلاً فقط در ترکیه گزارش شده بود. آغازگرهای طراحی شده به طور مقرون به صرفه و به طور اختصاصی قادر بودند ژن </span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: arial,sans-serif;">FAH</span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"> را تکثیر کنند. هم‌چنین میتوان از این آغازگرها &nbsp;جهت شناسایی افراد ناقل بیماری و همین‌طور تشخیص قبل از تولد بیماری تیروزینمی نوع یک استفاده کرد.</span></span><br> &nbsp;<br> &nbsp; <strong>Background & aim: </strong>Tyrosinemia is a recessive autosomal genetic disease due to the defect of fumaril acetoacetate hydrolase (FAH). About 40 pathogenic mutations have been reported for this gene. The aim of the present study was to determine and design polymerase chain reaction primers and their ability to identify FAH gene mutations causing type I tyrosinemia.<br> &nbsp;<br> <strong>Methods</strong>: In the present case-control study, 12 patients were recruited and divided into two equal groups: first six patients with type I tyrosinemia and second group six patients without informed consent. Blood samples were taken. Then, the DNA was extracted. The polymerase chain reaction initiator was designed for parts of the gene which reported in previous studies of the mutation. The specificity of primers designed with online databases was evaluated. Gene fragments were amplified by polymerase chain reaction. Then the amplified fragments were sequenced after purification. Finally the sequenced regions analyzed by Vector NTI software.<br> &nbsp;<br> <strong>Results</strong>: Designed primers amplified FAH gene segments specifically and sequencing of amplified segments revealed +709 C>T mutation in exon 10 of FAH gene. The patient&#39;s parents were carriers of this genetic mutation. In the control group no mutation was found in the FAH gene.<br> &nbsp;<br> <strong>Conclusion:</strong>&nbsp; The nonsense mutation 709 C> T is a pathogenic mutation in the FAH gene that was previously reported only in Turkey. The designed primers were cost-effective and specifically able to amplify the FAH gene. These primers can also be used to identify carriers of the disease as well as prenatal diagnosis of type I tyrosinemia.<br> &nbsp;<br> &nbsp; تیروزینمی نوع یک, تشخیص ژنتیکی, توالی یابی, واکنش زنجیره‌ای پلیمراز Type I Tyrosinemia, Genetic Diagnosis, Sequencing, Chain Reaction 820 829 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-1821-1&slc_lang=fa&sid=1 A Keshtkari علی کشتکاری a_keshtkari@yahoo.com 100319475328460019874 100319475328460019874 Yes Department of Pediatrics, Yasuj University of Medical Sciences, Yasuj, Iran گروه اطفال، دانشگاه علوم پزشکی یاسوج، یاسوج، ایران S Samanpour سکینه سامانپور sakineh.samanpour@gmail.com 100319475328460019875 100319475328460019875 No Department of Pediatrics, Yasuj University of Medical Sciences, Yasuj, Iran گروه اطفال، دانشگاه علوم پزشکی یاسوج، یاسوج، ایران SE Hosseini ابراهیم حسینی seyedebrahim.hossini@yums.ac.ir 4231670765 100319475328460019876 No Cellular and Molecular Research Center, Yasuj University of Medical Sciences, Yasuj, Iran مرکز تحقیقات سلولی و مولکولی، دانشگاه علوم پزشکی یاسوج، یاسوج، ایران S Hassanzadeh سجاد حسن زاده 100319475328460019877 100319475328460019877 No Department of Internal, Yasuj University of Medical Sciences, Yasuj, Iran گروه داخلی، دانشگاه علوم پزشکی یاسوج، یاسوج، ایران