Armaghane Danesh

fa مقایسه عملکردی مونوسیت‌های جدا شده از فلاسک‌های کشت در روش‌های لیدوکائین/EDTA ، تریپسین و PBS سرد/EDTA Functional Comparison of monocytes isolated from culture flask by lidocaine/EDTA, trypsin and cold-PBS/EDTA ایمونولوژی Immunology پژوهشي Research چکیده زمینه و هدف: دسترسی آسان، استحصال سریع و پتانسیل بالای درمانی سلول‌های مونوسیت، موجب شده که در تحقیقات سلول درمانی توجه ویژه‌ای به این سلول شود. مونوسیت‌ها از جمله سلول‌های چسبنده به فلاسک محسوب می‌شوند، بنابراین یافتن روش جداسازی مناسب که کمترین آسیب به سلول و عملکرد آن برساند از اهمیت خاصی برخوردار است. هدف از این مطالعه  مقایسه قابلیت‌های عملکردی مونوسیت بعد از جداسازی با سه روش <a name="_Hlk484273254">لیدوکائین/</a>EDTA ،<a name="_Hlk484269431"> تریپسین</a> و PBS سرد/EDTA بود..   روش بررسی: در این مطالعه تجربی،بعد از استخراج سلولهای تک هستهای خون محیطی از موش بالب سی، سلولها(107×1 سلول در میلی لیتر) در محیط کشت RPMI در فلاسک کشت T25 به مدت 4 ساعت انکوبه شدند. بعد از اتمام زمان انکوباسیون سلولهای غیر چسبنده (عمدتاً لنفوسیت‌ها) با دو بار شستشوی آرام جدا شده و از فلاسک خارج شد. سپس برای جداسازی سلولهای مونوسیت چسبیده از 3 روش تریپسین، روش لیدوکائین و فسفات بافر سالین سرد استفاده و بعد از جداسازی سلولها با هر روش، قابلیتهای عملکردی مونوسیتها سنجیده شد و با هم دیگر مقایسه شدند. دادههای جمع‌آوری شده با استفاده آنالیز  واریانس یک طرفه تجزیه و تحلیل شدند. <a name="_Hlk484269949"></a>   یافتهها: میزان استحصال، زنده مانی، فعالیت متابولیک، درصد فاگوسیتوز، انفجار تنفسی، میزان نیتریک اکساید و قابلیت مخمر کشی در سلولهایی که با روش لیدوکائین جداشده بودند، نسبت به گروههای دیگر به طور معنی‌داری بیشتر بود. هرچند که شیوه استفاده از تریپسین با وجود اینکه موجب استحصال سلول بیشتری نسبت به روش PBS سرد میشود، ولی این سلولها در مقایسه با روش لیدوکائین/EDTA و یا <a name="_Hlk484269398">PBS</a> سرد/EDTA، اختلال فیزیولوژیک قابل توجهی دارند. برداشت نوترال رد به وسیله سلول‌های مونوسیت جداسازی شده با روش تریپسین نسبت به دو روش دیگر در سطح پایینتری بود. در مقایسه بین شیوه PBS سرد و لیدوکائین به نظر میرسد که  بین مونوسیتهای به دست آمده از دو روش فوق، از نظر برداشت نوترال رد اختلاف معنی‌داری وجود ندارد.   نتیجه‌گیری: در مقایسه با روش‌های تریپسین وPBS سرد/EDTA، روش لیدوکائین/EDTA یک مناسب جهت جداسازی مونوسیت‌های چسبیده به کف فلاسک به دلیل استحصال سلول‌های بشتر و کارآمد میباشد.     Abstract   Background & aim: Easy access, rapid recovery and high potency of monocyte cell therapy have led to special attention in cell therapy research. Monocytes are considered as sticky cells to the flask. Therefore, finding the appropriate isolation method that has the least damage to the cell and its function is of particular importance. The purpose of this study was to compare the functional capabilities of monocytes after isolation with three methods: lidocaine / EDTA, trypsin and cold PBS / EDTA.   Methods: In this experimental study, after extraction of peripheral blood mononuclear cells from Balb / c mice, cells (107 × 1 cells / ml) were incubated in RPMI culture medium in T25 culture flask for 4 hours. After incubation time, non-adherent cells (mainly lymphocytes) were separated by two rinsing and removed from the flask. Three different methods of trypsin, lidocaine and phosphate buffer saline were used for isolation of monocyte cells. After isolating the cells with each method, the functional capabilities of the monocytes were measured and compared with each other. The collected data were analyzed using one-way ANOVA.   Results: The amount of extraction, survival, metabolic activity, phagocytosis percentage, respiratory explosion, nitric oxide levels, and yeast potential in cells isolated by lidocaine were significantly higher than other groups. Although the use of trypsin, although it results in the removal of more cells, is cooled to the PBS method, but these cells exhibit significant physiological impairment in comparison with the Lidocaine / EDTA or PBS / EDTA method. Neutral red uptake was detected by trypsin isolated monocyte cells in comparison to the other two methods at lower levels. In comparison between cold PBS and lidocaine, it seems that there is no significant difference between the monocytes obtained from the two methods in terms of neutralization.   Conclusion: Compared to trypsin and PBS / EDTA, the Lidocaine / EDTA method is an appropriate method for isolating monocytes adherent to the flask, due to the extraction of more efficient and efficient cells.   .   جداسازی, عملکرد, مونوسیت, لیدوکائین, تریپسین, بافر فسفات سالین Isolation, Function, Monocyte, Lidocaine, Trypsin, Phosphate Buffered Saline 145 160 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-337-3&slc_lang=fa&sid=1 H Esmaili Gourvarchin Galeh هادی اسمعیلی گورچین قلعه h.smaili69@yahoo.com 100319475328460013364 100319475328460013364 No Department of Microbiology, Urmia University, Urmia, Iran, گروه میکروبیولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران، SM Abtahi Froushani سیدمیثم ابطحی فروشانی meysamabtahi@hotmail.com 100319475328460013365 100319475328460013365 Yes Department of Microbiology, Urmia University, Urmia, Iran, گروه میکروبیولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران N Afzal Ahangaran ناهیده افضل آهنگران n.a.ahangran@gmail.com 100319475328460013366 100319475328460013366 No Department of Microbiology, Urmia University, Urmia, Iran, گروه میکروبیولوژی، دانشگاه ارومیه، ارومیه، ایران، S Naji Hadai سیامک ناجی حدادی najihadadi.s@umsu.ac.ir 100319475328460013367 100319475328460013367 No Solid Tumor Research Center, Urmia University of Medical Sciences, Urmia, Iran. گروه پاتولوژی، مرکز سالید تومور، دانشگاه علوم پزشکی ارومیه، ارومیه، ایران