Armaghane Danesh

fa همسانه سازی و توالی یابی ژن‌های ویرولانسompA و smpA اسینتوباکتر بامانی Cloning and Sequencing of the ompA and smpA Virulence Genes of Acentobacter baumannii Isolated in Clinical Samples میکروبیولوژی Microbiology پژوهشي Research چکیده زمینه و هدف: اسینتوباکتر بامانی یک پاتوژن نوظهور و مهم در بروز عفونت‌های مختلف از قبیل؛ عفونت دستگاه ادراری، بیمارستانی، مننژیت و دستگاه تنفسی می‌باشد. هدف از این مطالعه همسانه سازی و توالی یابی ژنهای ویرولانس ompA و smpA اسینتوباکتر بامانی بیماریزا می باشد. مواد و روش ها: در این مطالعه نیمه تجربی، سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی بر روی محیط‌های بلاد آگار و مک کانکی آگار کشت داده شد. تشخیص و تأیید اسینتوباکتر بامانی به روشهای میکروسکوپی، کشت میکروبی و بیوشیمیایی انجام شد. دو ژن ompA و smpA با تکنیک PCR تکثیر و درون وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T کلون شدند. صحت سازواره نوترکیب به دو روش PCR و هضم آنزیمی‌ دوگانه انجام شد. دو ژن ompA و smpA  کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T توالی یابی شدند. سپس ژنهای ompA و smpA درون وکتور پروکاریوتی ساب کلون گردیده و بیان آنها در باکتری اشرشیا کلی به روش SDS-PAGE  بررسی شد.   یافته‌ها: سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی با روش های بیوشیمیایی و میکروبیولوژی تایید شد. از الکتروفورز محصولات PCR دو باند 1150 و 411 جفت بازی به دست آمد که به ترتیب مربوط به ژن‌های ompA و smpA بود. نتایج انجام PCR و هضم آنزیمی دوگانه روی پلاسمیدهای نوترکیب، درستی تشکیل pTZ57R/T-ompA و pTZ57R/T-smpA را نشان داد. نتایج تعیین توالی، صحت کلون سازی را مشخص نمود.   نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده نشان داد که پلاسمیدpTZ57R/T برای کلون سازی قطعات بزرگDNA مناسب می‌باشد و با توجه به حفاظت شدگی بالای دو ژن ompA و smpA  برای ساخت واکسن می‌توان از آنها استفاده نمود.      Abstract Background and aim: Acinetobacter baumannii is one of the emerging and important pathogens in various infections such as urinary tract infection, hospitals, meningitis and respiratory tract. The aim of this research is cloning and sequencing of ompA and smpA virulence genes of A. baumannii.   Methods: In this experimental study, the pathogenic A. baumannii was cultured on blood agar and macconkey agar mediums. Recognition of A. baumannii with microscopic, microbiologic and biochemical tests were performed. ompA and smpA genes were amplified by PCR and then cloned into the pTZ57R/T vector. The accuracy of the recombinant construct was carried out with PCR and enzymatic double digestion and then the both of ompA and smpA genes were sequenced. The evaluation of bacterial expression of these genes was performed with SDS-PSGE method in E. coli.   Result: The pathogenic A. baumannii was confirmed in biochemical and microbiological methods. After electrophoresis of the PCR products, the 1150 and 411 bp fragments of ompA and smpA genes were obtained, respectively. The results of PCR and double digestions on recombinant plasmids showed that the pTZ57R/T-ompA and pTZ57R/T-smpA were generated. The sequencing results confirmed the accuracy of the gene cloning.   Conclusion: The results showed that the pTZ57R/T is a suitable vector for the cloning of large fragment of PCR products and ompA and smpA are two highly conserved genes that appropriate for use as DNA vaccine.   اسینتوباکتر بامانی, همسانه سازی, تعیین توالی, Acinetobacter baumannii, Cloning, ompA, smpA, Sequencing 1207 1217 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-846-1&slc_lang=fa&sid=1 H Ansari حسین انصاری Hosseinansari62@gmail.com 100319475328460012656 100319475328460012656 Yes Department of Genetic, Marvdasht branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran, گروه ژنتیک مولکولی، واحد علوم و تحقیقات فارس، دانشگاه آزاد اسلامی، شیراز، ایران A Doosti عباس دوستی abbasdoosti@yahoo.com 100319475328460012660 100319475328460012660 No Biotechnology Research Center, Shahrekord Branch, Islamic Azad University, Shahrekord, Iran مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران، M Kargar محمد کارگر microkargar@gmail.com 100319475328460012657 100319475328460012657 No Department of Microbiology, Jahrom Branch, Islamic Azad University, Jahrom, Iran, گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران M Bizhanzadeh مهدی بیژن زاده mbijanz@yahoo.com 100319475328460012658 100319475328460012658 No Department of Medical Genetic, Jundishapoor University of Medical Sciences Ahvaz, Ahvaz, Iran, 5گروه ژنتیک پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران M Jafarinya مجتبی جعفری نیا jaafarinia@yahoo.com 100319475328460012659 100319475328460012659 No Department of Genetic, Marvdasht branch, Islamic Azad University, Marvdasht, Iran, گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت، ایران،