Armaghane Danesh
ارمغان دانش
armaghanj
Medical Sciences
http://armaghanj.yums.ac.ir
1
admin
1728-6506
1728-6514
10.61882/armaghanj
en
jalali
1396
3
1
gregorian
2017
6
1
22
2
online
1
fulltext
fa
بررسی وجود ژن cry در باسیلوس ترینجینسیس های جدا شده از خاک
The characterization Molecular of cry genes in the Bacillus thuringiensis isolated from soil
میکروبیولوژی
Microbiology
پژوهشي
Research
<h1 dir="RTL" style="line-height: 115%;"><a name="_Toc442086228"><span style="font-size: 16pt;"><span style="font-family: yagut;">چکیده</span></span></a></h1>
<strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">زمینه و هدف</span></span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">: باسیلوس</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">ترینجینسیس</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">باکتری</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">گرم</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">مثبت</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">و</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">اسپورزا</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">است.</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">اصلیترین</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">زیستگاه</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">این</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">باکتری</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">خاک</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">بوده</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">و توانایی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">تولید</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">انواع</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">متنوعی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">از</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">پروتئینهای</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">کریستالی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">با</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">خاصیت</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">حشرهکشی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">را</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">داراست.</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">هدف</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">از</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">این</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">مطالعه</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">جداسازی سویههای باسیلوس ترینجینسیس حمل کننده ژن </span></span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">Cry</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">از خاک های نقاط مختلف استان تهران با استفاده از روش </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">Multiplex-PCR</span></span></span></span> <span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"><span style="font-size: medium;">بود.</span></span></span><br>
<br>
<strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">روش بررسی</span></span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">: در این مطالعه توصیفی ـ تحلیلی مقدار 200 گرم خاک از عمق 10 سانتی متری به طور تصادفی و در مجموع تعداد 100 نمونه خاک از مناطق مختلف شهر تهران جمعآوری شد. سپس بر اساس پروتوکل تأیید شده به وسیله</span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 7pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">WHO</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">، کلنیهای مشکوک به باسیلوس تورنجینسیس جداسازی و ایزوله ها از نظر تست های میکروبیولوژیکی و بیوشیمیایی تأیید شدند. پس از استخراج </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 7pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">DNA</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> از تمامیسویهها، با استفاده از</span></span></span> <span dir="LTR"><span style="font-size: 7pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">16S rDNA PCR Sequencing</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> باسیلوس ترینجینسیس بودن سویههای حاوی ژن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 8pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">Cry</span></span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">تأیید شد، دادهها با استفاده از آزمون آماری واریانس یک طرفه تجزیه و تحلیل شدند.</span></span></span><br>
<br>
<strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">یافتهها</span></span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">: در نمونههای خاک مورد بررسی، 41 سویه باسیلوس تورینجنسیس شناسایی شد. نتایج </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 7pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">MPCR</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> نشان داد که از 14 سویه حامل توکسین کریستالی، 7 سویه (50 درصد) به تنهایی واجد ژن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">cry1</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">، 4 سویه (5/28درصد) به تنهایی واجد ژن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">cry2</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> و 3 سویه (5/21 درصد) به تنهایی واجد ژن </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">cry3</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> بودند و باندهای مربوطه را نشان دادند. ژن</span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">cry4</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> و </span></span></span><span dir="LTR"><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: times new roman,serif;"><span style="color: black;">cry5</span></span></span></span><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> در هیچکدام از ایزولهها (صفردرصد) مشاهده کن. </span></span></span><br>
<br>
<strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">نتیجه گیری</span></span></span></strong><span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">: با</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">توجه</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">به</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">تنوع</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">بسیار</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">زیاد</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">ژن</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">پروتئین</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">کریستالی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">و</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">عدم</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">وجود</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">روشهای</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">فنوتیپی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">دقیق</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">در</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">شناسایی</span></span></span> <span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;">حضور پروتئین کریستالی، بنابراین تشخیص همزمان این ژنها میتواند با هزینه اندک و سرعتالعمل زیاد باسیلوسهای حاوی ژن کریستالی را شناسایی نماید.</span></span></span><br>
<br>
<span style="font-size: 10pt;"><span style="font-family: yagut;"><span style="color: black;"> </span></span></span><br>
<p align="right" dir="RTL" style="background: white; margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: left; line-height: normal;"><b><span dir="LTR" new="" style="font-family:;" times=""><font color="#000000"> </font></span></b></p>
<p align="right" dir="RTL" style="background: white; margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: left; line-height: normal;"><b><span dir="LTR" style="font-family:;"><font color="#000000"> </font></span></b></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 8pt; text-align: left; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><font color="#000000"><b><span style="line-height: 107%; font-family:;">Background & aim: </span></b><i><span style="line-height: 107%; font-family:;">Bacillus thuringiensis</span></i><span style="line-height: 107%; font-family:;"> (Bt) is a Gram-positive and sporulating bacteria. The main habitat of the bacteria is soil and able to produce a wide variety of insecticidal crystal protein's with Insecticide properties. The aim of the study was to detection of <i>cry1, cry2, cry3, cry4 </i>and<i> cry5</i> genes in the <i>B. thuringiensis</i> isolated from soil samples by Multiplex-PCR method.</span></font></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><font color="#000000"><b><span style="line-height: 115%; font-family:;">Methods:</span></b><span style="line-height: 115%; font-family:;"> In this cross-sectional study, 200 grams of soil sample randomly were collected from at 10 cm depth and totally 100 soil samples were taken from different areas of Tehran, Iran. According to the protocol approved by WHO, suspected colonies on <i>B. thuringiensis </i>isolated and strains were confirmed by the microbiological and biochemical tests. After DNA extraction Multiplex-PCR using specific primers in thermal cycler gradient the presence of cry genes were confirmed. Data were analyzed using one-way ANOVA.</span></font></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><b><span style="line-height: 115%; font-family:;"><font color="#000000"> </font></span></b></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><font color="#000000"><b><span style="line-height: 115%; font-family:;">Results:</span></b><span style="line-height: 115%; font-family:;"> Out of 100 soil samples studied, 41 strains were confirmed as <i>B. thuringiensis</i>. MPCR results showed that 14 strains carrying the crystalline toxin, 7 strains (50%) cry1, 4 strains (5.28%) cry2 and 3 strains (5.21%) cry3 genes. Cry4 and cry5 genes were not observed in any isolates (0.0%).</span></font></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><b><span style="line-height: 115%; font-family:;"><font color="#000000"> </font></span></b></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><font color="#000000"><b><span style="line-height: 115%; font-family:;">Conclusion:</span></b><span style="line-height: 115%; font-family:;"> Based on great diversity of crystal protein genes and the absence of reliable phenotypic methods for detection of the presence of crystal proteins, simultaneous identification of these genes can be found as low cost and high speed response for identification of crystalline genes produced by <i>B. thuringiensis</i>.</span></font></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><b><span style="line-height: 115%; font-family:;"><font color="#000000"> </font></span></b></p>
<p style="margin: 0cm 0cm 0pt; text-align: justify; line-height: 115%; unicode-bidi: embed; direction: ltr;"><font color="#000000"><span style="line-height: 115%; font-family:;"> </span></font></p>
باسیلوس تورینجنسیس, ژنهای کری
Bacillus thuringiensis, cry genes, Multiplex-PCR
271
281
http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-753-1&slc_lang=fa&sid=1
R
Mahmoudi
رضا
محمودی
rezamahmoudi6969@yahoo.com
100319475328460013342
100319475328460013342
No
Department of Toxicology, Shahreza Branch, Islamic Azad University, shahreza, Iran
گروه سم شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرضا، شهرضا، ایران،
GH
Irajian
غلامرضا
ایراجیان
girajian@yahoo.com
100319475328460013343
100319475328460013343
No
Department of Microbiology, Iran University of Medical Sciences, Tehran, Iran,
گروه میکروب شناسی، دانشگاه ایران، تهران، ایران،
I
Javadi
ایرج
جوادی
100319475328460013344
100319475328460013344
Yes
Department of Toxicology, Shahreza Branch, Islamic Azad University, shahreza, Iran
گروه سم شناسی، دانشگاه آزاد اسلامی واحد شهرضا، شهرضا، ایران،
E
Panahi kokhdan
اسماعیل
پناهی کوخدان
esmaeel_panahi@yahoo.com
100319475328460013345
100319475328460013345
No
Department of Biology, University of Guilan, Rasht, Iran
گروه زیست شناسی، دانشگاه گیلان، رشت، ایران