fa طراحی روش بررسی اتصال سلولی پروتئین‌ها بر پایه الایزا قابل استفاده در ژن‌درمانی برون ت عمومى General پژوهشي Research <p dir="RTL"><strong>زمینه و هدف:</strong> یکی از راهکارهای بهبود ژن درمانی، هدفمند کردن ژن، درمانگر می&shy;باشد. افزودن توالی&shy;های کد کننده پپتیدها و یا پروتئین&shy;های با گرایش بالا به سلول&shy;های هدف ژن&shy; درمانگر کد کننده پروتئین ترشحی، از جمله این روش&shy;ها محسوب می&shy;شود. با این وجود ارزیابی کارآمدی چنین تغییراتی در هدفمندسازی محصول ژن با روش&shy;های معمول بررسی اتصال سلولی پروتئین&shy;های درمانگر تولید شده در سیستم پروکاریوتی، به طور مستقیم امکان‌پذیر نیست. هدف از این مطالعه طراحی روشی بر مبنای آزمون الیزا برای بررسی اتصال سلولی پروتئین_&shy;&shy;&shy;های حاصل از ژن درمانی بود.</p> <p dir="RTL"></p> <p dir="RTL"><strong>مواد و روش&shy;ها:</strong> به منظور هدفمندسازی ژن درمان‌گر <span dir="LTR">Mda-7</span>، با روش مهندسی ژنتیک، توالی کد کننده پپتید <span dir="LTR">RGD4C</span>، که گرایش زیادی به اینتگرین&shy;های سطحی سلول&shy;های سرطانی دارد، را درست بعد از توالی پپتید نشانه مصنوعی و در ناحیه کد کننده انتهای آمین پروتئین تعبیه کردیم. سپس این <span dir="LTR">cDNA</span> تغییر یافته و <span dir="LTR">cDNA</span> بدون تغییر در ناقل بیانی یوکاریوتی <span dir="LTR">pCDNA3.1</span> همسان&shy;سازی شد. ناقل&shy;ها در رده سلولی <span dir="LTR">HEK-293</span> ترانسفکت شدند. سپس میزان بیان <span dir="LTR">Mda-7</span> ترشح شده در محیط کشت سلول&shy;ها با آزمون الیزا سنجیده شد. پس از همسان&shy; کردن غلظت پروتئین<span dir="LTR">Mda-7</span> &nbsp;و <span dir="LTR">RGD.Mda-7</span> در محیط&shy;های کشت سلول&shy;های ترانسفکت شده، از آنها به عنوان منبع این پروتئین&shy;ها استفاده شد. کاهش غلظت محصول این ژن&shy;ها دو ساعت پس از مجاورت با رده&shy;های سلولی داری اینتگرین&shy;&nbsp; <span dir="LTR">HepG2</span>، <span dir="LTR">M21</span> و فاقد اینتگرین <span dir="LTR">Saos-2</span> با روش الیزا بررسی و مقایسه شد. این آزمایش سه مرتبه به طور مستقل انجام گرفت. داده‌ها با استفاده از آزمون آماری تی تست تجزیه و تحلیل شد.</p> <p dir="RTL"></p> <p dir="RTL"><strong>یافته‌ها: </strong>بررسی آماری نتایج، حاکی از این بود که محصول ژن <span dir="LTR">RGD.Mda-7</span> نسبت به محصول ژن <span dir="LTR">Mda-7</span> جهت اتصال به سلول‌های دارای اینتگرین&nbsp; <span dir="LTR">HepG2</span> و <span dir="LTR">M21</span> به طور معنی&shy;داری گرایش بیشتری دارد، در حالی که جهت اتصال به رده سلولی فاقد اینتگرین <span dir="LTR">Saos-2</span> تفاوت معنی‌داری نداشتند.</p> <p dir="RTL"></p> <p dir="RTL"><strong>بحث: </strong>به نظر می&shy;رسد روش طراحی شده در این تحقیق، راه&shy;کار مناسبی جهت ارزیابی اتصال سلولی پروتئین&shy;ها در کاربردهای ژن درمانی باشد.</p> <p dir="RTL"></p><p align="left" dir="RTL"></p> <p><strong>Background & aim: </strong>One of the strategies to improve the therapeutic gene is targeting gene therapy. A method which can be considered, is adding code sequences peptide or protein with high tendency to target cells and secreting the therapeutic gene encodes a protein. However, evaluating the effectiveness of such changes in the targeted cell binding protein gene product with the usual therapeutic methods produced in prokaryotic system is directly impossible. The purpose of this study was to evaluate the design methods of cell adhesion proteins based on ELISA usable in-vitro in gene therapy.</p> <p></p> <p><strong>Methods: </strong>In order to target the therapeutic gene Mda-7 by using genetic engineering, peptide coding sequence RGD4C with the tendency to cancerous cell surface integrin were inserted shortly after the artificial signal peptide sequence and the N-terminal coding region of the protein. Then, the modified and unmodified cDNA eukaryotic expression vector pCDNA3.1 were matched. Vectors were transfected in HEK-293 cell line. Then Mda-7 secreted expression levels were measured in cell culture by ELISA. After adjusting the protein concentration of Mda-7 and RGD.Mda-7, in cells transfected media, they were used as a source of protein. Reduce the concentration of these genes was assessed two hours after exposure to the integrin cell lines with HepG2, M21 and lacking integrin Saos-2&nbsp; were also determined by ELISA. The present study was conducted three times independently.&nbsp; Data were analyzed using t-test.</p> <p></p> <p><strong>Results</strong>: Statistical analysis of the results suggested that the gene product of the gene product RGD.Mda-7 and Mda-7 to connect to HepG2 cells and M21 were more likely to have integrin. While binding to the cell lines of Saos-2, no significant difference were observed.</p> <p></p> <p><strong>Conclusions: </strong>It seems the present ELISA based method was a suitable strategy for cell attachment assay in gene therapy research.</p> <p></p> <p></p> سنجش اتصال سلولی, الیزا, RGD.Mda-7 , RGD Cell adhesion assays, ELISA, RGD.Mda-7 , RGD 372 381 http://armaghanj.yums.ac.ir/browse.php?a_code=A-10-724-4&slc_lang=fa&sid=1 E Hosseini ابراهیم حسینی 100319475328460018553 100319475328460018553 No Department of Molecular Genetics, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran, گروه ژنتیک مولکولی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران، SY Hosseini سیدیونس حسینی 100319475328460018554 100319475328460018554 No Department of Bacteriology and Virology, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran گروه ویروس شناسی و باکتری شناسی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران T Hashempour طیبه هاشم‌پور 100319475328460018555 100319475328460018555 No Department of Medical Virology, Alborzi Clinical Microbiology Research Center, Namazi Hospital, Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran, مرکز تحقیقات عفونی، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران، MR Fattahi محمدرضا فتاحی 100319475328460018556 100319475328460018556 No Gastroenterohepatology Research Center (GEHRC), Shiraz University of Medical Sciences, Shiraz, Iran مرکز تحقیقات کبد و گوارش، دانشگاه علوم پزشکی شیراز، شیراز، ایران M Sadeghizadeh مجید صادقی‌زاده sadeghma@modares.ac.ir 100319475328460018557 100319475328460018557 Yes Department of Molecular Genetics, Tarbiat Modares University, Tehran, Iran, گروه ژنتیک مولکولی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران،