کلون کردن اپیتوپهای خطی آنتی ژن P14-3-3 در وکتور pEGFP-N1 به عنوان یک مدل واکسن DNAجهت القا ایمنی علیه کیست هیداتیک و بررسی بیان آن در رده سلولی CHO
|
رقیه مصری1 ، مجید اسمعیلی زاد 2، سید عبدالحمید انگجی1 ، محمد طهماسب1 ، مژگان احمدزاده1 ، سمیه محمدی1 |
1- گروه سلولی و مولکولی، دانشگاه خوارزمی، تهران، ایران 2- آزمایشگاه مرکزی، مؤسسه تحقیقات واکسن و سرمسازی رازی، البرز، ایران ، m.esmaelizad@rvsri.ac.ir |
|
چکیده: (4441 مشاهده) |
زمینه و هدف: کیست هیداتیک در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد میشود. در مرحله لاروی این انگل آنتیژنهای متعددی تولید میشود که یکی از این آنتیژنها، آنتیژنی از خانواده پروتئینهای p14-3-3 میباشد و واکسن نوترکیب آن ایمنیزایی قابل توجهی را در موش القا کرده است. با توجه به ایمونوژنتر بودن نواحی اپیتوپی آنتیژنها و تولید پاسخ ایمنی Th1 مطلوب هدف از این مطالعه کلون کردن اپیتوپهای خطی این آنتیژن شناسایی شده در وکتور N1–pEGFP بود که در ساخت یک مدل DNA واکسن مؤثر بود.
روش بررسی: در این مطالعه تجربی پس از شناسایی اپیتوپهای خطی آنتیژن p14-3-3 توسط نرمافزارهای بیوانفورماتیکی، توالی کدکننده آن به صورت سنتتیک فراهم شد، پس از تکثیر با واکنش PCR و هضم توسط آنزیم محدود کننده XhoI، در وکتور N1 – pEGFP تخلیص شده با روش سمبروک تغییر یافته که همراه با استفاده از CaCl2 وPEG6000 میباشد کلون شده و کلونیهای مثبت حاوی وکتور نوترکیب ابتدا به روش colony PCR و سپس توالییابی تأیید شد. برای بررسی بیان در سلولهای یوکاریوت با روش الکتروپوریشن به رده سلولیCHO منتقل شدند.
یافتهها: توالی کد کننده اپیتوپهای خطی آنتیژن P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس پس از شناسایی، سنتز و تکثیر در وکتورpEGFP-N1 که تخلیص آن با روش جدید به خوبی با حداکثر غلظت پلاسمید و حداقل مقدار RNA همراه است، کلون شده و پس از تأیید کلونینگ، بیان آن نیز در رده سلولی CHO به عنوان نمونهای از سلولهای یوکاریوت به صورت موفقیتآمیز با میکروسکوپ فلورسنت انجام شد و استفاده از سازه حاصل در قالب واکسن ژنی برای بررسی پاسخ ایمنی در مدلهای موشی در مراحل بعدی پژوهش انجام خواهد شد.
نتیجهگیری: نتایج حاصل از توالی یابی، تأیید کننده کلونینگ صحیح توالی کد کننده اپیتوپهای خطی آنتیژن &zeta P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP-N1 بوده و نتایج حاصل از میکروسکوپ فلورسانس نشانگر بیان موفقیتآمیز پروتئین نوترکیب در سلول یوکاریوتیCHO میباشد.
واژههای کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کلونینگ، DNA واکسن،P14-3-3
خش وارد کنید |
|
واژههای کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کلونینگ، DNAواکسن، P14-3-3 |
|
متن کامل [PDF 341 kb]
(1259 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
انگل شناسی دریافت: 1394/3/16 | پذیرش: 1394/6/9 | انتشار: 1394/7/20
|
|
|
|