زمینه و هدف: کیست هیداتیک در اثر آلودگی با لارو انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس ایجاد می­شود. در مرحله لاروی این انگل آنتی­ژن­های متعددی تولید می­شود که یکی از این آنتی­ژن­ها، آنتی­ژنی از خانواده پروتئین­های p14-3-3 می­باشد و واکسن نوترکیب آن ایمنی‌زایی قابل توجهی را در موش القا کرده است. با توجه به ایمونوژن­تر بودن نواحی اپی­توپی آنتی­ژن­ها و تولید پاسخ ایمنی  Th1 مطلوب هدف از این مطالعه کلون کردن اپی­توپ­های خطی این آنتی­ژن شناسایی شده در وکتور N1–pEGFP بود که در ساخت یک مدل  DNA واکسن مؤثر بود.

روش بررسی: در این مطالعه تجربی پس از شناسایی اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن p14-3-3 توسط نرم­افزارهای بیوانفورماتیکی، توالی             کد­کننده آن به صورت سنتتیک فراهم شد، پس از تکثیر با واکنش PCR  و هضم توسط آنزیم محدود کننده  ‌XhoI، در وکتور            N1 – pEGFP تخلیص شده با روش سمبروک تغییر یافته که همراه  با استفاده از CaCl2 وPEG6000  می­باشد کلون شده و کلونی­های مثبت حاوی وکتور نوترکیب ابتدا به روش colony PCR و سپس توالی‌یابی تأیید شد. برای بررسی بیان در سلول­های یوکاریوت با روش الکتروپوریشن به رده سلولیCHO  منتقل شدند.

یافته­ها: توالی کد کننده اپی­توپ­های خطی آنتی­ژن P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس پس از شناسایی، سنتز و تکثیر در وکتورpEGFP-N1 که تخلیص آن  با روش جدید به خوبی با حداکثر غلظت پلاسمید و حداقل مقدار RNA همراه است، کلون شده و پس از تأیید کلونینگ، بیان آن نیز در رده سلولی CHO به عنوان نمونه­ای از سلول­های یوکاریوت به صورت موفقیت­آمیز با میکروسکوپ فلورسنت انجام شد و استفاده از سازه حاصل در قالب واکسن ژنی برای  بررسی پاسخ ایمنی در مدل­­های موشی در مراحل بعدی پژوهش انجام خواهد شد.

نتیجه­گیری: نتایج حاصل از توالی یابی، تأیید کننده کلونینگ صحیح توالی کد کننده اپی­توپ_­­­­­های خطی آنتی­ژن &zeta P14-3-3 انگل اکینوکوکوس گرانولوزوس در وکتور pEGFP-N1  بوده و نتایج حاصل از میکروسکوپ فلورسانس نشانگر بیان موفقیت­آمیز پروتئین نوترکیب در سلول یوکاریوتیCHO می­باشد.

واژه‌های کلیدی: اکینوکوکوس گرانولوزوس، کلونینگ، DNA واکسن،P14-3-3

خش وارد کنید