|
تشخیص اتصال پپتید ضد رگزایی به سلول‌های HUVEC با استفاده از FITC
|
فهیمه امینی سپهر1    ، محسن اصغری1 ، مصطفی شوریان 2 |
1- گروه زیست شناسی، دانشگاه گیلان، رشت، گیلان، ایران
2- گروه زیست شناسی، دانشگاه گیلان، رشت، گیلان، ایران ، shourian@guilan.ac.ir |
|
|
چکیده: (2967 مشاهده) |
زمینه و هدف: رگزایی تولید عروق خونی جدید از عروق موجود است. رگزایی وابسته به وجود تعادل بین فاکتورهای فعال کننده و مهار کننده آن است. اندواستاتین، یک قطعه 20 کیلو دالتونی از کلاژن XVIII و عضوی از گروه پروتئینهای مهار کننده رگزایی میباشد که تکثیر و مهاجرت سلول‌های اندوتلیال و تشکیل ساختار لوله مانند را مهار میکند. استفاده از روشهای رنگ سنجی به واسطه پروبهای فلورسنت به عنوان ردیاب، کاربرد گسترده‌ای دارد، لذا هدف از این مطالعه تعیین و تشخیص اتصال پپتید ضد رگزایی به سلول‌های اندوتلیای بند ناف انسانی با استفاده از یک نشانگر فلورسنس بود.
روش بررسی: در این مطالعه تجربی قطعه 27 آمینواسیدی مربوط به دمین انتهای آمینوی پروتئین اندواستاتین، با FITC به عنوان یک نشانگر فلورسنس، نشانه‌گذاری شد. از روش کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون به وسیله سفادکس G10 برای جداسازی پپتیدهای اتصال یافته استفاده شد و در نهایت به منظور تأیید اتصال FITC به پتید از روش FTIR استفاده شد. سلول‌های اندوتلیال بندناف انسانی بعد از کشت با پپتیدهای اتصال یافته به نشانگر تیمار شدند و با استفاده از میکروسکپ فلورسانس به منظور مشاهده اتصال پپتید به رسپتور خود بر روی سطح این سلول‌ها مطالعه گردید.
یافته‌ها: نتایج این مطالعه با میکروسکوپ فلورسانس اتصال این پتید ضد رگزایی به گیرنده مخصوص خود بر روی سلول‌های اندوتلیال را تأیید میکند. جهت رسیدن به شرایط مناسب برای نشانه‌گذاری پپتیدها، شرایط مختلف آزمایشی از قبیل غلظت پپتید و FITC و زمان و دمای انکوبه شدن مورد بررسی قرار گرفت. FITCهای آزاد به وسیله روش کروماتوگرافی ژل فیلتراسیون از نمونه‌های کانژوگه FITC-peptideجدا شدند. سلول‌های اندوتلیال بند ناف انسانی (HUVEC) کشت داده شده با نمونه‌های کانژوگه FITC-peptide تیمار شد. سپس سلول‌ها تثبیت و به وسیله میکروسکوپ فلوئورسانس مطالعه شدند.
نتیجه‌گیری: در این تحقیق اتصال بین FITC، به عنوان یک پروب فلورسانس به پپتید در یک شرایط بهینه انجام شد. به علاوه نشان دادیم که این کمپلکس قابل جداسازی میباشد. از طرفی نتایج تحقیقات حاکی از این است که پپتید مشتق از اندواستاتین به نحو مؤثری به سلول‌های HUVEC متصل شده است. این روش راهکار درستی برای شناسایی این اتصال میباشد. اتصال پروب فلورسنت به پپتید می‌تواند به عنوان یک ابزار مولکولی مناسب برای مطالعات آینده در دو حوزه in vitro و in vivoاستفاده شود.
|
|
| واژه‌های کلیدی: پپتید ضدرگ‌زایی، فلوئورسین ایزوتیوسیانات، سلول‌های اندوتلیال بندناف انسانی |
|
|
متن کامل [PDF 3976 kb]
(691 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
بیوشیمی
دریافت: 1398/1/30 | پذیرش: 1398/6/11 | انتشار: 1398/6/30
|
|
|
|
|
|
|
| ارسال پیام به نویسنده مسئول |
|
|
|
| ارسال نظر درباره این مقاله |
|
|
|
