|
همسانه سازی و توالی یابی ژنهای ویرولانسompA و smpA اسینتوباکتر بامانی
|
حسین انصاری   1، عباس دوستی2 ، محمد کارگر3 ، مهدی بیژن زاده4 ، مجتبی جعفری نیا5 |
1- گروه ژنتیک مولکولی، واحد علوم و تحقیقات فارس، دانشگاه آزاد اسلامی، شیراز، ایران ، Hosseinansari62@gmail.com
2- مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، واحد شهرکرد، دانشگاه آزاد اسلامی، شهرکرد، ایران،
3- گروه میکروبیولوژی، واحد جهرم، دانشگاه آزاد اسلامی، جهرم، ایران
4- 5گروه ژنتیک پزشکی، دانشگاه علوم پزشکی جندی شاپور اهواز، اهواز، ایران
5- گروه ژنتیک مولکولی، واحد مرودشت، دانشگاه آزاد اسلامی، مرودشت، ایران، |
|
|
چکیده: (4350 مشاهده) |
چکیده
زمینه و هدف: اسینتوباکتر بامانی یک پاتوژن نوظهور و مهم در بروز عفونت‌های مختلف از قبیل؛ عفونت دستگاه ادراری، بیمارستانی، مننژیت و دستگاه تنفسی می‌باشد. هدف از این مطالعه همسانه سازی و توالی یابی ژنهای ویرولانس ompA و smpA اسینتوباکتر بامانی بیماریزا می باشد.
مواد و روش ها: در این مطالعه نیمه تجربی، سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی بر روی محیط‌های بلاد آگار و مک کانکی آگار کشت داده شد. تشخیص و تأیید اسینتوباکتر بامانی به روشهای میکروسکوپی، کشت میکروبی و بیوشیمیایی انجام شد. دو ژن ompA و smpA با تکنیک PCR تکثیر و درون وکتور پلاسمیدی pTZ57R/T کلون شدند. صحت سازواره نوترکیب به دو روش PCR و هضم آنزیمی دوگانه انجام شد. دو ژن ompA و smpA کلون شده در پلاسمید pTZ57R/T توالی یابی شدند. سپس ژنهای ompA و smpA درون وکتور پروکاریوتی ساب کلون گردیده و بیان آنها در باکتری اشرشیا کلی به روش SDS-PAGE بررسی شد.
یافته‌ها: سویه بیماریزای اسینتوباکتر بامانی با روش های بیوشیمیایی و میکروبیولوژی تایید شد. از الکتروفورز محصولات PCR دو باند 1150 و 411 جفت بازی به دست آمد که به ترتیب مربوط به ژنهای ompA و smpA بود. نتایج انجام PCR و هضم آنزیمی دوگانه روی پلاسمیدهای نوترکیب، درستی تشکیل pTZ57R/T-ompA و pTZ57R/T-smpA را نشان داد. نتایج تعیین توالی، صحت کلون سازی را مشخص نمود.
نتیجه‌گیری: نتایج به دست آمده نشان داد که پلاسمیدpTZ57R/T برای کلون سازی قطعات بزرگDNA مناسب می‌باشد و با توجه به حفاظت شدگی بالای دو ژن ompA و smpA برای ساخت واکسن می‌توان از آنها استفاده نمود.
|
|
| واژه‌های کلیدی: اسینتوباکتر بامانی، همسانه سازی، تعیین توالی |
|
|
متن کامل [PDF 585 kb]
(1217 دریافت)
|
نوع مطالعه: پژوهشي |
موضوع مقاله:
میکروبیولوژی
دریافت: 1395/7/23 | پذیرش: 1395/12/7 | انتشار: 1395/12/25
|
|
|
|
|
|
